DNA基因合成儀主要用于基因合成、構建克隆及基因組變體文庫合成,按用途可以分為三類(lèi):
工業(yè)型合成儀合成通量較大,主要用于大型生物實(shí)驗室以及商業(yè)機構中;
實(shí)驗室型合成儀合成通量較小,主要用于生物實(shí)驗室中;
大規模合成型合成儀可進(jìn)行規?;慨a(chǎn),主要用于生物醫藥原料藥制備領(lǐng)域。隨著(zhù)基因治療以及生物醫藥行業(yè)快速發(fā)展,預計未來(lái)工業(yè)性以及大規模合成型DNA合成儀需求增速將加快。
DNA基因合成儀合成產(chǎn)物的回收純化方式:
合成儀上合成的粗產(chǎn)物,使用濃氨水將寡核苷酸鏈從載體CPG上化學(xué)切割下來(lái)并脫去堿基環(huán)上的保護基團,再使用各種純化方式去除合成過(guò)程中形成的短片段,得到合乎要求的DNA片段。合成后的處理步驟:
1.切割:將合成好的寡核苷酸鏈從支持物上化學(xué)切割下來(lái)。
2.脫保護基:須在此步前選好后續的純化方法。一般用新鮮的濃氨水處理較長(cháng)時(shí)間以脫掉腈乙基、苯甲?;?、異丙基,用三氟乙*脫5’-DMT.
3.純化:根據所合成寡核苷酸的組成和應用來(lái)選定純化的方法。
4.定量:根據寡核苷酸在260nm處的紫外吸收來(lái)定量。
5.儲存:需要注意的是避免紫外線(xiàn)等劇烈的物理環(huán)境,避免反復凍融,-20℃可穩定保存一年以上。